Meintioliad protein-lliwimetometrig sbectroffotometrig
Fel arfer mae proteinau yn gymysgedd o broteinau. Mae profion colorimetrig yn seiliedig ar gyfansoddion protein: mae asidau amino (ee, tyrosin, serine) yn ymateb gyda grw p neu lliw cromogenig ychwanegol i gynhyrchu deunydd lliw. Mae crynodiad y deunydd lliw yn uniongyrchol gysylltiedig â nifer yr asidau amino y mae'r protein yn adweithio, gan adlewyrchu'r crynodiad protein.
Dull lliwimetrig
Mae sawl dull fel BCA, Bradford, a Lowry.
Dull Lowry: Yn seiliedig ar yr adwaith Biuret cynharaf a gwell. Mae'r protein yn adweithio gyda Cu2 i gynhyrchu adwaith glas. Fodd bynnag, mae dull Lowry yn fwy sensitif na Biuret. Yr anfantais yw'r angen i ychwanegu nifer o adweithyddion gwahanol yn ddilynol; mae'r ymateb yn cymryd amser hir; yn agored i sylweddau nad ydynt yn brotein; nid yw proteinau sy'n cynnwys EDTA, Triton x-100, a sulfate amonia yn addas ar gyfer y dull hwn.
Asesiad asid Bicinchoniinine: Mae hwn yn assay protein mwy newydd, mwy sensitif. Mae'r protein i'w dadansoddi yn ymateb gyda Cu2 mewn datrysiad alcalïaidd i gynhyrchu Cu, sy'n ffurfio celat gyda BCA i ffurfio cyfansawdd porffor gyda brig amsugno yn 562 nm. Mae'r berthynas llinol rhwng crynodiad y cyfansawdd hwn a'r protein yn gryf, ac mae'r cyfansawdd a ffurfiwyd ar ôl yr adwaith yn sefydlog iawn. Yn gymharol â dull Lowry, mae'r llawdriniaeth yn syml ac mae'r sensitifrwydd yn uchel. Fodd bynnag, yn debyg i'r dull Lowry, mae'n agored i ymyrraeth â phroteinau a glanedyddion.
Dull Bradford: Egwyddor y dull hwn yw bod y protein yn adweithio gyda Coomassie Brilliant Blue i gynhyrchu cyfansoddyn lliw sy'n amsugno ar 595 nm. Ei nodwedd fwyaf yw ei sensitifrwydd, sef 2 waith Lowry a BCA. Mae'n symlach ac yn gyflymach. Dim ond un math o adweithydd ymateb sy'n ei gwneud yn ofynnol. Gall y cyfansawdd fod yn sefydlog am 1 awr i hwyluso'r canlyniad; Mae ymyrryd â Lowry, BCA yn ymateb gydag asiantau lleihau (ee DTT, mercaptoethanol) yn gydnaws. Fodd bynnag, mae'n dal i fod yn sensitif i glanedyddion. Y prif anfantais yw y gall safonau gwahanol arwain at wahaniaethau mawr yng nghanlyniadau'r un sampl a dim canlyniadau cymharol.
Efallai y bydd rhai ymchwilwyr sy'n agored i fesuriadau colorimetrig am y tro cyntaf yn cael eu drysu gan ganlyniadau'r gwahanol brofion lliwimetrig. Pa fath o ddulliau ydych chi'n credu eu bod yn ddryslyd? Oherwydd y ffaith bod y grwpiau'n ymateb mewn gwahanol ffyrdd ac nid yw'r grwpiau cromogenig yr un fath, defnyddir sawl dull ar yr un pryd i wneud y crynodiadau sampl o'r un sampl yn anghyson. Er enghraifft, Keller et al. profi'r protein mewn llaeth dynol a chanfu bod y crynodiadau a fesurwyd gan Lowry a BCA yn sylweddol uwch na Bradford. Roedd y gwahaniaeth yn arwyddocaol. Hyd yn oed os penderfynir yr un sampl, mae'r sampl safonol a ddewisir gan yr un dull lliwimetrig yn anghyson, ac mae'r crynodiad ar ôl y prawf hefyd yn anghyson. Er enghraifft, defnyddiwch Lowry i brofi'r protein yn homogenate'r gell, gan ddefnyddio BSA fel safon, gyda chrynodiad o 1.34 mg / ml, a globulin fel safon gyda chrynodiad o 2.64 mg / ml. Felly, cyn dewis dull colorimetrig, mae'n well cyfeirio at gyfansoddiad cemegol y sampl sydd i'w brofi, a darganfod protein safonol sy'n debyg i gemeg fel safon. Yn ogystal, mae'r dull lliwimetrig ar gyfer mesur proteinau yn aml yn achosi problemau gan fod gwerth amsugniad y sampl yn rhy isel, gan arwain at wahaniaeth mawr rhwng y crynodiad sampl a fesurir a'r crynodiad gwirioneddol. Y mater allweddol yw bod lliw rhan bwysig y sbectroffotomedr 1011, y cuvette, â hanner bywyd penodol, felly mae pob dull lliwimetrig yn rhestru amser prawf yr adwaith. Rhaid i bob sampl (gan gynnwys samplau safonol) gael eu profi o fewn yr amser hwn. Os yw'r amser yn rhy hir, mae'r gwerth amsugniad a geir yn dod yn llai ac mae'r gwerth crynodiad wedi'i drawsnewid yn gostwng. Yn ogystal, mae tymheredd yr adwaith, gwerth pH yr ateb, ac ati yn ffactorau pwysig sy'n effeithio ar yr arbrawf. Yn ogystal, mae'n bwysig iawn defnyddio lliwiau plastig. Peidiwch â defnyddio cuvettes a wneir o chwarts neu wydr oherwydd bydd y lliw ar ôl yr adwaith yn achosi cwarts neu wydr i'w lliwio, gan arwain at amsugniad anghywir o'r sampl.
Mae'r cwmni'n arbenigo mewn gwerthu sbectroffotometr , croeso i gwsmeriaid sydd angen ymgynghori a phrynu, byddwn yn darparu cynnyrch gwasanaeth a safon ddiffuant i chi, yn ogystal â phrisiau is.
E-bost: info@sumerlab.com
Gwe: sumerinstrument.com