Mae sbectroffotomedrau wedi dod yn offerynnau arferol mewn labordai bioleg foleciwlaidd modern. Yn aml, fe'i defnyddir ar gyfer asid niwcleig, meintioli protein a meintioli crynodiadau twf bacteriol.
Egwyddor syml sbectroffotomedr
Mae'r sbectroffotomedr yn defnyddio ffynhonnell olau sy'n gallu cynhyrchu tonfeddi lluosog, ac mae'n pasio drwy gyfres o ddyfeisiau sbectrosgopig i gynhyrchu ffynhonnell o oleuni o donfedd benodol. Ar ôl i'r ffynhonnell oleuni fynd drwy'r sampl i'w phrofi, caiff rhan o'r ffynhonnell golau ei hamsugno, a chaiff amsugnedd y sampl ei gyfrifo, gan drosi i mewn i grynodiad sampl. . Mae amsugnedd y sampl yn gymesur â chrynodiad y sampl.
Meintioli asidau niwclëig
Meintioli asidau niwclëig yw swyddogaeth y sbectroffotomedr a ddefnyddir amlaf. Gellir meintioli Oligonucleotides, DNA un-sownd, dau-linyn, ac RNA mewn clustogfa. Uchafbwynt amsugno brig brig amsugno asid niwclëig yw 260 nm. Mae cyfansoddiad moleciwlaidd pob asid niwcleig yn wahanol, felly mae'r ffactorau trawsnewid yn wahanol. I fesur gwahanol fathau o asidau niwcleig, dewiswch y cyfernodau cyfatebol ymlaen llaw. Er enghraifft, mae amsugnedd 1 OD yn cyfateb i 50 μg / ml o dsDNA, 37 μg / ml o ssDNA, 40 μg / ml o RNA, a 30 mlg / ml o Olig. Caiff yr amsugnedd ar ôl y prawf ei drosi gan y cyfernodau uchod i gael y crynodiad sampl cyfatebol. Cyn profi, dewiswch y weithdrefn gywir, nodwch gyfaint yr hydoddiant stoc a'r gwanydd, ac yna profwch yr ateb gwag a sampl. Fodd bynnag, nid oedd yr arbrawf bob amser yn llyfn. Efallai mai darlleniadau ansefydlog yw'r cur pen mwyaf i'r arbrofwr. Mae offerynnau â sensitifrwydd uwch yn dangos mwy o ddrifft mewn amsugnedd.
Yn wir, mae egwyddor ddylunio ac egwyddor waith y sbectroffotomedr yn caniatáu i'r amsugnedd amrywio o fewn ystod benodol, hynny yw, mae gan yr offeryn gywirdeb a thrachywiredd penodol. Er enghraifft, cywirdeb y Biophotometer Eppendorf yw ≤1.0% (1A). Mae canlyniadau profion lluosog o'r fath yn amrywio rhwng tua 1.0% o'r cymedr ac maent yn normal. Yn ogystal, mae hefyd angen ystyried priodweddau ffisochemegol yr asid niwcleig ei hun a pH y byffer lle mae'r asid niwclëig yn cael ei doddi, y crynodiad ïonau, ac ati: Pan fo'r crynodiad ïon yn rhy uchel yn ystod y prawf, mae'r darllen sifftiau, felly argymhellir defnyddio gwerth pH penodol a chrynodiad ïon isel. Mae bwffe, fel TE, yn sefydlogi darlleniadau yn fawr. Mae crynodiad gwanhau'r sampl hefyd yn ffactor na ellir ei anwybyddu: oherwydd presenoldeb anochel rhai gronynnau mân, yn enwedig samplau asid niwclëig, yn y sampl. Mae presenoldeb y gronynnau bach hyn yn amharu ar ganlyniadau'r prawf. Er mwyn lleihau effaith y gronynnau ar ganlyniadau'r prawf, mae'n ofynnol i amsugnedd yr asid niwclëig fod yn fwy na 0.1 A o leiaf, a gorau oll os yw'r amsugnedd rhwng 0.1 a 1.5 A. O fewn yr ystod hon, ymyrraeth y mae gronynnau yn gymharol fach ac mae'r canlyniad yn sefydlog.
Mae hyn yn golygu na ddylai crynodiad y sampl fod yn rhy isel neu'n rhy uchel (y tu hwnt i amrediad prawf y ffotomedr). Yn olaf, dylai'r ffactorau gweithredu, megis cymysgu fod yn ddigonol, neu fel arall mae'r gwerth amsugnedd yn rhy isel, hyd yn oed werthoedd negyddol; ni all y cymysgedd fodoli swigod, nid oes gan yr hylif gwag unrhyw fater wedi ei atal, neu fel arall mae'r darlleniad yn symud yn sylweddol; rhaid defnyddio'r un cuvette i brofi'r gwag a'r sampl Fel arall, mae'r gwahaniaeth mewn crynodiad yn rhy fawr; caiff y ffactor trosi a'r uned crynodiad sampl eu dewis yn gyson; ni ellir defnyddio'r cuvette â gwisg ffenestr; rhaid i gyfaint y sampl gyrraedd y cyfaint lleiaf sy'n ofynnol gan y cuvette.
Yn ogystal â'r crynodiad asid niwclëig, mae'r sbectroffotomedr hefyd yn dangos nifer o gymarebau pwysig iawn sy'n dangos purdeb y sampl, megis cymhareb A 260 / A 280, a ddefnyddir i asesu purdeb y sampl oherwydd bod brigyn amsugno'r protein yn 280 nm. Sampl bur gyda chymhareb sy'n fwy nag 1.8 (DNA) neu 2.0 (RNA). Os yw'r gymhareb yn is nag 1.8 neu 2.0, mae'n dangos presenoldeb protein neu sylweddau ffenolig. Mae A 230 yn dangos bod rhai halogion yn bresennol yn y sampl, fel carbohydradau, peptidau, ffenolau, ac ati, ac mae cymhareb yr asid niwclëig piwr A A A / A / 230 yn fwy na 2.0. Mae 320 yn canfod cymylogrwydd yr hydoddiant a ffactorau ymyrraeth eraill. Ar gyfer samplau pur, mae A 320 yn gyffredinol 0.
Co Offeryn Sumer Hangzhou, Ltd
Ychwanegu: No.168 Wuchang Ave., Dosbarth Yuhang, Hangzhou 310023, Tsieina
TEL: + 86-571-88739859
Ffôn: +8618658504900
E-bost: info@sumerlab.com
Gwe: sumerinstrument.com